[科普中國(guó)]-PAS染色法

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在組織學(xué)上，主要用來(lái)檢測(cè)組織中的糖類。過(guò)碘酸把糖類相鄰兩個(gè)碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應(yīng)使呈現(xiàn)紫紅色。

原理PAS染色又稱過(guò)碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用來(lái)顯示糖元和其它多糖物質(zhì)。1

原理：過(guò)碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛，再與Schiff氏液的無(wú)色品紅結(jié)合，紅色，定位于胞漿上。

方法固定液Carnoy固定液： 純酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 **30ml,**也可以選用75%酒精。

液配制1) 過(guò)碘酸酒清夜配法:

過(guò)碘酸**(HIO4·2H2O) 0.4g** 95%酒精 35ml M/5醋酸鈉(2.72g+蒸餾水100ml) 5ml蒸餾水10ml。

保存于冰箱內(nèi)，用棕色瓶，可用兩周。

2)Schiff氏液:

0.5克堿性品紅加入100毫升蒸餾水中，時(shí)時(shí)搖動(dòng)三角瓶5分鐘，使之充分溶解。冷卻至50℃后過(guò)濾加入10毫升1N鹽酸，冷卻至25℃，加入0.5-1克偏重硫酸鈉，在室溫中至少靜置24小時(shí),然后密封冰箱保存。

3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 純酒精 23ml

4) 亞硫酸水 1%偏重亞硫酸鈉10ml 1N HCI 10ml 蒸餾水 180ml的樹膠溶解。

5）哈瑞或邁耶蘇木精

染色步驟1. 石蠟切片脫蠟至水（細(xì)胞涂片，冰凍切片直接水洗）；

2. 蒸餾水洗；

3. 過(guò)碘酸酒清夜10min；

4. 自來(lái)水沖洗10min；

5. Schiff氏液10min；

6. 流水沖洗5min；

7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細(xì)胞核染色過(guò)深可用鹽酸酒精分化）；

8. 流水沖洗5min；

9. 常規(guī)脫水、透明、封固。

結(jié)果PAS陽(yáng)性為紅色，細(xì)胞核藍(lán)色。

實(shí)驗(yàn)效果準(zhǔn)備1、10g/L過(guò)碘酸液

2、Schiff染液：

堿性品紅 0.5g

DH2O 100ml

煮沸后，待片刻，加入堿性品紅，振蕩數(shù)分鐘使品紅溶解，冷至50℃加入1M的鹽酸20ml，混勻。待冷卻至25℃加入偏重亞硫酸鈉0.5g，混合，置于帶塞的棕色瓶中，放于暗處24小時(shí)，染液為無(wú)色，如為微紅則加活性炭1－2g，混合過(guò)濾，如過(guò)濾液仍有紅色，應(yīng)再加少許活性炭，時(shí)紅色完全被吸收為止。制成后置于棕色瓶?jī)?nèi)保存在冰箱備用，如變?yōu)榧t色，則不能使用。

4、蘇木素液：

蘇木素 0.9g

95%乙醇 10ml

銨（鉀）明礬 20g

DH2O 200ml

將蘇木素溶于95%的乙醇，鉀明礬溶于水（可加熱），然后將蘇木素液加入明礬液中混合，用強(qiáng)火煮沸后加氧化汞0.5g，迅速攪拌，成深紫色，迅速移入冷水中，次日過(guò)濾，臨用時(shí)取此液95ml加冰醋酸5ml，可使細(xì)胞著色清楚。

方法1、將新鮮血片或骨髓片用95%乙醇固定10分鐘；

2、10g/L過(guò)碘酸液作用20分鐘；

3、DH2O洗滌幾次，晾干；

4、Schiff染液，60分鐘；

5、用自來(lái)水洗滌15分鐘（細(xì)水長(zhǎng)流沖洗）；

6、蘇木素染液10分鐘；

7、自來(lái)水沖洗15分鐘，待干。

結(jié)果陽(yáng)性反應(yīng)，胞漿呈紅色，陰性反應(yīng)，胞漿呈無(wú)色；在正常血片中RBC不染色；PLT染成深紅色；中性粒細(xì)胞胞漿染成紅色或深紅色，有些細(xì)胞有陽(yáng)性顆粒；單核細(xì)胞的胞漿染成淡紅色，可含有細(xì)小或粗大陽(yáng)性顆粒；少數(shù)淋巴細(xì)胞的胞漿內(nèi)含有少許小的淡紅色或紅色顆粒；正常骨髓的幼稚細(xì)胞和有核RBC都不染色；巨核細(xì)胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色。巨核細(xì)胞的胞漿內(nèi)呈彌散紅色或深紅色。

應(yīng)用隨著醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，糖原染色應(yīng)用的范圍更加廣泛，如用以證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì) ，心肌病變及其他心血管疾病的診斷 ，糖原累積病診斷和研究 ，糖尿病的診斷和研究 ，用于某些腫瘤的診斷等。除用于糖原的鑒定和黏液的顯示外 ，還可以觀察腎小球基底膜 、結(jié)腸杯狀細(xì)胞 中性黏液物質(zhì) 、阿米巴滋養(yǎng)體和霉菌的著色。臨床診斷、分類和治療提供 了重要的依據(jù)。1

本詞條內(nèi)容貢獻(xiàn)者為:

杜強(qiáng) - 高級(jí)工程師 - 中國(guó)科學(xué)院工程熱物理研究所