[科普中國]-咖啡因分配熒光法

咖啡因分配熒光法研究背景

苯并(a)芘(BaP)是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。由于環(huán)境和食品加工過程的污染，食品中特別是煙熏的肉類、油脂和水產(chǎn)品常含有超過衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的苯并(a)芘；動物性食品在加工過程中或加工工藝不合理時，燃料或脂肪受高溫而熱解產(chǎn)生苯并(a)芘，因而常需進(jìn)行檢驗(yàn)。食品中苯并(a)芘的分析常采用萃取分離凈化后再用各種色譜法測定；如國標(biāo)法采用二甲基亞楓或二甲基酰胺與環(huán)己烷或石油醚作液一液分配，缺點(diǎn)是常有乳化現(xiàn)象，且分離慢。

近年來，有人用Gertz的咖啡因絡(luò)合萃取法分離食品(特別是油脂)中的多環(huán)芳烴，凈化后用分光光度法、高壓液相色譜和氣相色譜進(jìn)行測定。在此基礎(chǔ)上用改進(jìn)的方法——咖啡因分配熒光法，凈化后用薄層板層析，直接用熒光掃描定量測定油脂中苯并(a)芘1。

咖啡因分配熒光法原理樣品的石油醚提取液，先以甲酸洗去雜質(zhì)，再以咖啡因的甲酸溶液萃取，苯并(a)芘以水溶性的咖啡堿復(fù)合物分離出來，經(jīng)薄層板層析與其他多環(huán)芳烴分離，紫外燈下定位后，進(jìn)行熒光掃描定量。

咖啡因分配熒光法的優(yōu)點(diǎn)（1）簡便、快速，樣品經(jīng)分配后，濃縮液用C18預(yù)處理柱處理，省去了膠層洗脫等步驟，節(jié)省時間，排除大量有毒試劑；

（2）結(jié)果準(zhǔn)確可靠，回收率基本滿足要求（國標(biāo)法回收率80.6%）；

（3）和國標(biāo)法相比，本法試劑便宜、低毒、用量少，主要試劑是咖啡因-甲酸，改善了對環(huán)境的污染，減少了對操作人員的毒性影響。

咖啡因分配熒光法具體步驟樣品的提取與優(yōu)化

（1）萃?。悍Q25g食用油與60mL石油醚混合轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用甲酸洗三次，每次20mL，振蕩2min，棄甲酸。用15%咖啡因-甲酸溶液連續(xù)萃取三次，每次20mL，振蕩3min。將三次收集的60mL萃取液轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，加2%硫酸鈉水溶液120mL，加石油醚50mL，猛烈振蕩4min，轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中分層。下層再轉(zhuǎn)入原三角燒瓶中，加石油醚50mL重提一次，合并兩次石油醚，以44%的甲酸洗2次，每次20mL，搖0.5min。

(2)濃縮定容：將石油醚通過裝有無水硫酸鈉的漏斗脫水，轉(zhuǎn)入濃縮儀中，減壓蒸至近干，以環(huán)己烷定容1mL。

(3)凈化：將此濃縮液通過C18預(yù)處理柱，密閉、避光、冷藏。

薄層層析

(1)點(diǎn)樣：將薄層板置點(diǎn)樣架上，距底邊2cm處用鉛筆劃一橫線，并標(biāo)出點(diǎn)樣位置，二點(diǎn)間距1cm以上，取40μL濃縮液和20μLBaP標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于薄層板上，斑點(diǎn)直徑最好在5mm以下(可借助吹風(fēng)機(jī)邊點(diǎn)邊吹)。

(2)展開：將點(diǎn)好的薄層板置于層析缸內(nèi)，缸內(nèi)預(yù)先加入展開劑，使底邊浸入溶液中(約0.5cm)，避光展開18-20cm，取出晾干，在紫外燈下作定位標(biāo)記。如分離不徹底，可重復(fù)展開，用薄層掃描儀作定量測定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

用標(biāo)準(zhǔn)貯備液配成0.5、1、2、4、8μg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別用5μL毛細(xì)管吸取點(diǎn)于薄板上，通過掃描，制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

最低檢出限

用1μL毛細(xì)管分別吸取0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00(μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)使用液，點(diǎn)于薄板上，經(jīng)薄層掃描，得出苯并(a)芘的檢測靈敏度為0.1ng。

方法的精密度試驗(yàn)

分別取7份豆油，苯并(a)芘加入量為0.2μg/kg，測定。

方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取香油6份每份25g，其中3份加入苯并(a)芘量為0.4μg/kg，另3份加入量為1μg/kg，測定。

利用CS-930雙波長薄層掃描儀測定油脂苯并(a)芘，具有選擇性強(qiáng)，應(yīng)用廣的優(yōu)點(diǎn)，為測定油脂中苯并(a)芘提供了一個新的方法2。