簡(jiǎn)介甘草甙的簡(jiǎn)介
甘草甙,亦名甘草苷。甘草為豆科甘草屬植物,其根、莖是常用的中草
藥,廣泛分布于我國(guó)的東北,新疆,云南,內(nèi)蒙古,安徽等地,《神農(nóng)本草經(jīng)》把它列為上品稱(chēng)“此草最為眾藥之王,經(jīng)方少有不用者”。甘草的成分復(fù)雜,主要含有三萜類(lèi),黃酮類(lèi),香豆精類(lèi)化合物, 其中黃酮類(lèi)是從甘草提取物中得到的一類(lèi)生物活性較強(qiáng)的成分,其藥化學(xué)成分主要有甘草素,異甘草素,甘草甙,異甘草甙,新甘草甙等。近年來(lái), 國(guó)內(nèi)外都有關(guān)于甘草黃酮類(lèi)化合物的清除自由基、抗氧化、抗促癌、抗致突的作用的報(bào)道1
化學(xué)名稱(chēng)4H-1-Benzopyran-4-one, 2- [4-(β-D-glucopyranosyloxy) phenyl]-2, 3-dihydro-7-hydroxy-, (S)
物理性質(zhì)一水合物 (稀乙醇或水), 熔點(diǎn) 212~213°℃1。
藥理作用毒 性:無(wú)
不良反應(yīng):暫未知
成分來(lái)源: 豆科植物光甘草 Glycyrrhiza glabra L. 根, 甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 根。
甘草甙的提取甘草原料的前處理甘草原料中的化學(xué)成分十分復(fù)雜,為獲得較好的分離效果以及減少雜質(zhì)對(duì)制備色譜柱的污染,同時(shí)提高目標(biāo)物甘草甙在進(jìn)樣原料中的含量,本實(shí)驗(yàn)采取萃取方法對(duì)原料進(jìn)行前處理。如下圖 1 用電子天平稱(chēng)取 4 g 干草放入燒杯中,用量筒準(zhǔn)確量取 100 mL 蒸餾水倒入燒杯中溶解,超聲 15 min 左右,并不斷用玻璃棒攪拌,加速溶解。然后將燒杯放入 90 ℃恒溫槽中加熱 2 h后熱過(guò)濾,將濾液加入正丁醇溶劑后,靜置數(shù)分鐘后,大部分的甙類(lèi)溶解于正丁醇溶劑中,接著進(jìn)行二次萃取,將殘留在水中的少量的甙類(lèi)萃取出來(lái),最后將二次萃取得到的正丁醇溶液合并濃縮,待層析純化2。
甘草甙層析純化取 10 mL 上述萃取后的產(chǎn)品作為備用的原料,啟動(dòng)泵,流速設(shè)置 25 mL/min,由流動(dòng)相(甲醇:水=1:4)將原料帶入 500 mm×40 mm 的制備柱內(nèi),根據(jù)出峰的情況收集干草甙產(chǎn)品的餾份:前 1 h 的餾份作為前雜質(zhì)餾份收集在一起,然后改變流動(dòng)相比例用 50%的甲醇和水的混合液沖洗柱子,每 20 min 接一次產(chǎn)品,然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮各瓶產(chǎn)品后,取 20 μL 進(jìn)行 HPLC 色譜分析,直到檢測(cè)無(wú)目標(biāo)物為止。選取高效液相色譜檢測(cè)條件為:流動(dòng)相:甲醇:水=3.5:6.5;固定相:硅膠碳 18;色譜柱: 450 mm×4.6 mm;流速 :1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm 對(duì)各瓶產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè),得到每 20 min 接一次的產(chǎn)品中,第二瓶甘草甙的含量最高3。
甘草甙再次層析純化由于經(jīng)過(guò)一次層析純化后甘草甙的含量不高,所以選取同樣的方法,取 10 mL 上述純化后的產(chǎn)品作為備用的原料流速為 25 mL/min,由流動(dòng)相(甲醇:水=2:5)將第二瓶產(chǎn)品帶入 500 mm×20 mm 層析柱內(nèi),根據(jù)出峰的情況收集干草甙產(chǎn)品的餾份:每 4 min 接一次產(chǎn)品,然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮各瓶產(chǎn)品后,利用上述相同的檢測(cè)條進(jìn)行 HPLC 色譜分析,直到檢測(cè)無(wú)目標(biāo)物為止。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn),得到每 4 min 接一次的產(chǎn)品中,第 6 瓶甘草甙的含量最高,如圖 2 其中保留時(shí)間為 5.898 min 為目標(biāo)峰,經(jīng)面積歸一法計(jì)算含量達(dá)到 40%左右。
產(chǎn)品的后處理將收集的產(chǎn)品在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸餾,溫度為 70 ℃,待溶劑基本全部被蒸出后,用少量的甲醇溶解圓底燒瓶上的固體產(chǎn)品后,并到入試管中在室溫條件下結(jié)晶,直到有白色的粒狀晶體出現(xiàn)2。