[科普中國]-保健食品中前花青素的測定

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中前花青素的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于以葡萄籽、葡萄皮、沙棘、玫瑰果、藍(lán)漿果、法國松樹皮提取物等為主要原料制造的保健食品中的前花青素的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)的檢測限：方法的檢出限（LOD）為1.5×10-4g/100g；方法的定量限（LOQ）為5.0×10-4g/100g。線性范圍為10μg/mL~150μg/mL。

原理前花青素易溶于水，是黃烷-3-苯兒茶酚和表兒茶精連接而成，依據(jù)試樣中前花青素前體或聚合物在加熱的酸性條件和鐵鹽催化作用下，C-C鍵斷裂生成深紅色花青素離子即氰定的原理，使用高效液相色譜，利用C18反向柱分離，在波長525nm下檢測，根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量，測定試樣中前花青素含量。

試劑和材料1、甲醇（CH3OH）：分析純

2、甲醇（CH3OH）：色譜純

3、正丁醇(CH3(CH2)2CH2OH)：分析純

4、鹽酸（HCl）：分析純

5、二氯甲烷（CH2Cl2）：分析純

6、異丙醇(CH3)2CHOH）：分析純

7、甲酸（HCOOH）：分析純

8、硫酸鐵銨(NH4Fe(SO4)2·12H2O)：分析純

9、水（H2O）：為實驗室一級用水，電導(dǎo)率（25℃）為0.01mS/m

10、2%硫酸鐵銨(NH4Fe(SO4)2·12H2O溶液：稱取硫酸鐵銨2g，用濃度為2mol/L鹽酸溶解，定容至100mL。

11、前花青素標(biāo)準(zhǔn)品濃度≥98%

12、前花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL）：稱取0.01g前花青素標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.0001g），用色譜純甲醇溶解并定容至10mL，棕色容量瓶中，此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

儀器和設(shè)備1、高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。

2、超聲波清洗器。

3、離心機：4 000 r/min。

分析步驟1、試樣處理

（1）片劑：取20片試樣，研磨成粉狀。

（2）膠囊：取20粒膠囊內(nèi)容物，混勻。

（3）軟膠囊：擠出20粒膠囊內(nèi)容物，攪拌均勻，如內(nèi)容物含油，應(yīng)將內(nèi)容物盡可能擠完全。

（4）口服液：搖勻后取樣。

2、提取

（1）固體粉狀試樣：根據(jù)試樣含量稱取50 mg～500 mg(精確至0.001 g)試樣于50 mI。棕色容量瓶中，加入30 mI分析純甲醇，超聲處理20 min，放冷至室溫后，加分析純甲醇至刻度，搖勻，離心(3 000 r/min，10 min)或放置至澄清后取上清液備用。

（2）含油試樣：根據(jù)試樣含量稱取50 mg～500 mg(精確至0.001 g)試樣置于小燒杯中，用5 mI。二氯甲烷使試樣溶解，并倒入50 mI。容量瓶中，再用分析純甲醇多次洗燒杯，并倒入50 mL棕色容量瓶中，用分析純甲醇定容至刻度，搖勻。

（3）口服液：根據(jù)試樣含量準(zhǔn)確吸取1 mI～5 mL樣液，置于50 mL容量瓶中，加分析純甲醇至刻度，搖勻。

3、水解反應(yīng)

將正丁醇與鹽酸按95：5的體積比混合后，取出15 mL置于具塞錐瓶中，再加入0.5 mI硫酸鐵銨溶液和2 mI試樣溶液，混勻，置沸水浴回流，精確加熱40 min后，立即置冰水中冷卻，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，待進(jìn)高效液相色譜分析。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10、0.25、0.50、1.0、1.5 mI．置于10 mL棕色容量瓶中，加分析純甲醇至刻度，搖勻。各取2 mL測定，處理方法同上，以峰高或峰面積對濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、液相色譜參考條件

（1）色譜柱：耐低pH型的ODS C18柱，4.5 mm×150 mm，5μm。

（2）柱溫：35℃。

（3）檢測器：紫外檢測器。

（4）檢測波長：525 nm。

（5）流動相：水+甲醇(色譜級)+異丙醇+甲酸=73+13+6+8。

（6）進(jìn)樣量：10μL。

（7）流速：1.0 mL/min。

（8）色譜分析：取標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

6、 注意事項

實驗過程中應(yīng)避免陽光直射。

結(jié)果計算試樣中前花青素的含量按式(1)進(jìn)行計算：

X=X1×V×f/m （1）

式中：

X——-試樣中前花青素的含量，單位為克每千克或克每升(g/kg或g/L)；

X1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的含量，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)；

f——稀釋倍數(shù)；

m——試樣的質(zhì)量(或體積)，單位為克或毫升(g或mL)。

計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%1。

色譜圖在上述色譜條件下的色譜圖見圖1～圖2。